Антинуклеарный фактор на клеточной линии HЕp-2 с определением 6 типов свечения в Москве

Подробное описание исследования

В норме иммуноглобулины, или антитела, служат для защиты от микроорганизмов, чужеродных веществ и их возможного отрицательного воздействия на организм. Антитела синтезируются особым типом лимфоцитов — плазмоцитами и делятся на пять основных классов, которые обычно обозначаются как IgA, IgG, IgD, IgE и IgM. Они отличаются по своей структуре, концентрации в крови и выполняемым функциям.

При аутоиммунных заболеваниях организм вырабатывает патологические иммуноглобулины (аутоантитела). Они запускают каскад реакций, направленных на разрушение собственных клеток и тканей. Причины и точные механизмы этого процесса до конца неизвестны. Однако выделяют ряд предрасполагающих факторов, к которым, например, относится генетическая предрасположенность: наличие аутоиммунной патологии у кровных родственников.

Антинуклеарный фактор — это группа антител к компонентам ядра клетки, которая служит маркером наличия аутоиммунных заболеваний. К которым относятся:

1. Системная красная волчанка (СКВ);
2. Синдром Шегрена;
3. Системная склеродермия;
4. Смешанные заболевания соединительной ткани (СЗСТ), или синдром Шарпа;
5. Воспалительные миопатии (полимиозит, дерматомиозит).

Исследование заключается в определении патологических иммуноглобулинов, которые взаимодействуют с компонентами клеточного ядра: с ДНК, РНК и белками. Поэтому эти иммуноглобулины называются антинуклеарными антителами (АНА), а их совокупность — антинуклеарный фактор (АНФ).

Особенность теста состоит в том, что в качестве субстрата для иммунного ответа используется специальная культура HЕp-2 клеток, изначально полученная из раковых клеток гортани. Клетки HЕp-2 имеют крупное, хорошо различимое под микроскопом ядро и всегда располагаются на предметных стеклах в один слой.

В ходе исследования выделяют 6 типов свечения: гомогенное, периферическое, крапчатое, сетчатое крапчатое, дискретное крапчатое и нуклеолярное. Характер свечения отражает присутствие различных типов антиядерных антител. Тип свечения антител имеет связь с той или иной ревматической патологией, поэтому позволяет уточнить диагноз.

Определение антинуклеарного фактора с применением специальной культуры клеток HЕp-2 и определением 6 типов свечения необходимо в рамках диагностического поиска при подозрении на ревматологические заболевания. Для ряда заболеваний данный тест рассматривают как один из обязательных критериев диагноза.

Чувствительность метода для выявления ревматических заболеваний имеет высокий процент, который для системной красной волчанки составляет 93%.

В лаборатории «Гемотест» антинуклеарный фактор на клеточной линии HЕp-2 с определением 6 типов свечения определяется с помощью современного и точного оборудования и является достаточно доступным по цене.

ТРАКТОВКА РЕЗУЛЬТАТОВ.

У здоровых лиц моложе 60 лет следует ожидать отрицательных результатов на антитела к компонентам ядра и цитоплазмы; в низком титре (слабоположительный результат) эти антитела все же обнаруживаются у 2-3% (по некоторым данным, до 10%) практически здоровых людей, однако никогда нельзя предсказать, не разовьется ли у этих людей аутоиммунное заболевание в будущем (так, по данным некоторых авторов, антитела к ДНК начинают выявляться задолго до начала клинических проявлений СКВ, латентный период может продолжаться годами). После 60 лет частота слабоположительных результатов с возрастом постоянно растет. Клиническая значимость этих результатов остается неясной; как правило, они выявляются только в первичном (скрининговом) разведении 1:40. Исходя из этого, при выявлении положительного результата в скрининговом титре 1:40 всегда необходимо титрование, как минимум до диагностического титра 1:80. В любом случае представляется целесообразным последующее регулярное клинико-лабо­ра­торное наблюдение лиц, у которых выявлены ANA в низком титре. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА Положительный результат предполагает наличие определенных заболеваний (см. ниже), однако, как и результат любых лабораторных исследований, может нуждаться в подтверждении или уточнении с помощью других методов, а также в установлении клинико-лабораторных корреляций. Надо иметь в виду, что различные лекарственные препараты могут вызывать образование аутоантител (гидралазин, прокаинамид, фенитоин, карбамазепин, изониазид, хлорпромазин, пеницилламин, леводофа, пенициллин, фенилбутазон, пероральные контрацептивы, хинидин). Наиболее частыми мишенями для этих ятрогенных аутоантител являются ядерные гистоны, что приводит к развитию гомогенного или гомогенного периферического типа свечения.

Использованная литература

1. Федеральные клинические рекомендации. Лабораторная диагностика ревматических заболеваний. Москва, 2014.
2. Ревматология : национальное руководство / под ред. Е.Л. Насонова, В.А. Насоновой. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 720 с.
3. Лапин, С.В., Тотолян, А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. — СПБ.: Человек, 2010. — 272 с.
4. Лапин, С.В. Выявление антинуклеарных антител: международные рекомендации и собственный опыт, 2014.
5. Ревматические болезни: номенклатура, классификация, стандарты диагностики и лечения / под ред. В.Н.Коваленко, Н.М Шуба. — М.: Катран груп, 2002. — 214 с.

Описание

Синонимы (rus): Антинуклеарные антитела, АНФ, АНА
Синонимы (eng): ANA, antinuclear antibodies

Биоматериал: Венозная кровь

Показатель(и): Аутоантитела к ядерным и цитоплазматическим антигенам

Метод(и): Реакция непрямой иммунофлюоресценции

Тип контейнера и особенности преаналитики: Биохимическая пробирка с активатором свертывания,6 мл (красная или коричневая крышечка)

Антинуклеарные антитела – это семейство аутоантител, направленных против различных клеточных структур, включая ядро, ядерную мембрану, митотический аппарат, компоненты цитоплазмы , а также клеточные мембраны. Антинуклеарный фактор (АНФ) представляет собой иммунофлюоресцентный тест на перевиваемых клеточных линиях человека и является основным методом обнаружения антинуклеарных антител. Антитела выявляются за счет их связывания с антигенами клеточной линии HEp-2. Определение АНФ рекомендовано в качестве теста для скрининга антинуклеарных антител как множеством национальных рекомендаций, так и международными рекомендациями (Nancy Agmon-Levin et all, 2013). АНФ в титре >80 включен в новые классификационные критерии системной красной волчанки EULAR/ACR 2021 года. В комплексе с АНФ рекомендуется проводить исследование антител к экстрагируемому нуклеарному антигену (ENA скрин). Обнаружение АНФ требует установления специфичности аутоантител с помощью ряда уточняющих тестов, а именно иммуноблота антинуклеарных антител, иммуноблота антинуклеарных антител при системной склеродермии, иммуноблота при воспалительных миопатиях. В ряде случаев антигенную специфичность АНФ установить не удается в силу серологических реакций против конформационных, растворимых или неохарактеризованных антигенов антинуклеарных антител. Распределение антигенов внутри клетки определяет тип свечения ядра, который позволяет судить о спектре антинуклеарных антител, присутствующих в данной сыворотке. Типы свечения указаны согласно рекомендации Международной Согласительной группы по типам свечения АНФ (https://www.anapatterns.org).

Антиперинуклеарный фактор, IgG

Антиперинуклеарный фактор – это разновидность антицитруллиновых аутоантител, которые являются маркерами ревматоидного артрита.

Синонимы русские

АПФ.

Синонимы английские

Antiperinuclear factor (APF).

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антиперинуклеарный фактор (АПФ) – разновидность аутоантител, направленных против цитруллинсодержащих белков. К антицитруллиновым антителам также относятся антикератиновые антитела (АКА) и антитела к центральному цитруллинсодержащему пептиду (АЦЦП), которые являются маркерами ревматоидного артрита (РА) и часто определяются одновременно.

Ревматоидный артрит (РА) – хроническое системное аутоиммунное заболевание. Для него характерны воспаление, боль, скованность, деструкция и деформация пораженных суставов. Чаще всего он обнаруживается у женщин в 40-60 лет. В патологический процесс могут вовлекаться любые суставы. Заболевание может быстро прогрессировать, вызывать значительные изменения в суставах или в течение многих лет пребывать в ремиссии (период временного ослабления). Ранняя диагностика РА и своевременное начало лечения очень важны, так как при бездействии он грозит ограничением физической активности, инвалидностью и даже сокращением продолжительности жизни.

АПФ, как и другие антицитруллиновые антитела, связывает филаггрин, антигенные свойства которого обуславливает цитруллин. Цитруллин относится к нестандартным аминокислотам, он не входит в состав синтезируемых белков и не способен образовываться в процессе модификации аргинина. Реакция цитруллинирования – образование цитруллина – играет важную роль в клеточной дифференциации и апоптозе (запрограммированной гибели клеток). Патогенетическое значение антицитруллиновых антител в развитии ревматоидного артрита не до конца изучено и, вероятно, связано с накоплением цитруллина в воспаленной синовиальной оболочке, запуском апоптоза и перекрестными иммунологическими реакциями.

Антиперинуклеарный фактор был впервые описан Ниенхайсом и Мандемой в 1964 году как специфический маркер ревматоидного артрита. Он выявляется с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции в кератогиалиновых гранулах, окружающих ядро клеток эпителия щеки человека. При этом под микроскопом определяется специфическое свечение округлых гранул (3-8 на клетку), расположенных вокруг ядра.

Для АПФ характерна более высокая специфичность, чем для ревматоидного фактора (РФ), но более низкая чувствительность. Уровень АПФ не взаимосвязан с титрами РФ, что позволяет использовать данный тест при серонегативном РА в качестве независимого маркера. Этот анализ имеет большое значение в диагностике раннего РА. Чувствительность АПФ составляет 53-68 %, специфичность – 91-95 %.

Тест на антиперинуклеарный фактор часто назначается одновременно с анализом на антикератиновые антитела. АПФ и АКА встречаются достоверно чаще РФ в дебюте РА, отмечаются у 38 % больных с серонегативным РА.

АПФ и другие антицитруллиновые антитела обнаруживаются у больных с большей активностью заболевания, агрессивным течением РА и выраженным суставным синдромом, более высокими параметрами функциональной недостаточности, прогрессирующими рентгенологическими изменениями и резистентностью к базисной терапии.

АПФ в некоторых случаях может быть положительным у здоровых людей, у людей с другими аутоиммунными заболеваниями, поэтому результаты теста следует оценивать в комплексе с анамнезом и симптомами, а также с данными других анализов и инструментальных методов обследования.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики раннего ревматоидного артрита.
• Для диагностики серонегативного ревматоидного артрита.
• Для дифференциальной диагностики заболеваний с поражением суставов.
• Для составления прогноза ревматоидного артрита.

Когда назначается исследование?

• При симптомах ревматоидного артрита (отечности, болезненности суставов кистей, скованности в движении воспаленных суставов, повышении температуры тела, подкожных ревматических узелках).
• При обследовании пациента с суставным синдромом неясного происхождения.
• При отрицательном ревматоидном факторе у пациента с суставным синдромом.
• При обследовании пациента с рентгенологическими признаками эрозий суставных поверхностей костей.

Что означают результаты?

Референсные значения:

Причины повышенного результата:

• ревматоидный артрит,
• псориатический артрит (около 8 % случаев),
• системная красная волчанка (редко),
• синдром Шегрена (редко),
• диффузный токсический зоб (редко),
• вирусный гепатит С (очень редко).


Важные замечания

• Тест на антитела к циклическому цитруллинсодержащему пептиду (АЦЦП) считается более чувствительным методом диагностики, однако существует небольшой процент больных ревматоидным артритом, у которых при отрицательном АЦЦП выявляется положительный АНФ.
• Данный тест используется только для уточнения диагноза и прогноза течения заболевания, а не для оценки эффективности терапии.

Также рекомендуется

• Ревматоидный фактор
• Антитела к циклическому цитруллинсодержащему пептиду, IgG
• Антикератиновые антитела (АКА)
• Совместное определение антикератиновых антител и антиперинуклеарного фактора
• Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
• Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
• Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
• Антистрептолизин О
• Антитела к цитруллинированному виментину (анти-MCV)
• С-реактивный белок, количественно
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
• Белковые фракции в сыворотке
• anti-HCV, антитела
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Ревматолог.

Литература

1. Kim DA, Jearn LH, Kim TY. Antiperinuclear factor test is more useful than anti-Sa assay when used with anti-cycliccitrullinated peptide test in diagnosis of rheumatoid arthritis. J Rheumatol. 2007 Sep;34(9):1944-5.
2. Nienhuis R.L., Mandema E. A new serum factor in patients with rheumatoid arthritis, the antiperinuclear factor // Ann. Rheum. Dis. – 1964. – Vol. 23. – P. 302-305.
3. Rheumatology. Edited by Hochberg M. and others. 5th edition. Mosby Elsevier – 2010 – pp. 261-262.
4. Schellekens G.A., de Jong B.A., van den Hoogen F.H. et al. Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognised by rheumatoid arthritis specific autoantibodies // J. Clin. Invest. – 1998. – Vol. 101. – P. 273-281.
5. Маслянский А. Л., Лапин С. В., Иливанова Е. П., Мазуров В. И., Тотолян А. А. Антикератиновые антитела и антиперинуклеарный фактор являются маркером агрессивного течения ревматоидного артрита. Медицинская иммунология, 2003, Т. 5, № 5-6. – С. 599-608.

Показания

Исследовать антинуклеарный фактор целесообразно в следующих случаях:

• Диагностика аутоиммунных и некоторых других системных заболеваний без ярко выраженной симптоматики;
• Комплексная диагностика системной красной волчанки, ее формы и стадии, а также выбор тактики лечения и составление прогноза;
• Диагностика лекарственной волчанки;
• Профилактическое обследование пациентов с диагнозом красная волчанка;
• Наличие специфических симптомов: продолжительная лихорадка без установленной причины, боли и ломота в суставах, мышцах, кожные высыпания, повышенная утомляемость и т.д.;
• Наличие симптомов системных заболеваний: поражение кожи или внутренних органов (почки, сердце), артрит, эпилептические припадки и судороги, лихорадка, беспричинное повышение температуры и т.д.;
• Назначение лекарственной терапии дизопирамидом, гидралазином, пропафеноном, прокаинамидом, ингибиторами АПФ, бета-блокаторами, пропилтиоурацилом, хлорпромазином, литием, карбамазепином, фенитоином, изониазидом, миноциклином, гидрохлортиазидом, статинами, поскольку есть риск развития лекарственной красной волчанки.

При каких патологиях может быть обнаружен Антинуклеарный фактор в крови

Позитивность по АНФ на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке (СКВ), системных ревматических заболеваниях и многих аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным тестом в обследовании больных с аутоиммунной патологией. Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена. Выявление АНФ имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита и аутоиммунных заболеваний печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве других аутоиммунных (тиреоидит, диабет), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваний. Встречаемость АНФ достигает 1-3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет. Лица с высокими титрами АНФ имеют повышенный риск развития аутоиммунных заболеваний.

Норма для АНА и факторы влияния

В норме антинуклеарные антител в плазме отсутствуют или определяются в небольшом количестве. Результат зависит от способа выполнения теста:

1. Тест делался методом ИФА

• менее 0,9 пунктов — отрицательно (норма);
• от 0,9 до 1,1 пунктов — сомнительно (рекомендуется сделать повторный тест через 7-14 дней);
• более 1,1 пункта — положительно.

2. Для количественного анализа РНИФ нормой считается титр менее 1:160. 3. Иммуноблоттинг — норма —не обнаружено— (общее заключение / напротив каждого вида антител).

С какой целью определяют Антинуклеарный фактор

Исследование антинуклеарного фактора (АНФ) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител, позволяя выявлять аутоантитела к нуклеиновым кислотам (дсДНК, осДНК, РНК), рибонуклеопротеинам, а также большинству конформационных и нерастворимых антигенов. Антинуклеарные антитела в данном методе обнаруживают благодаря их связыванию с внутриклеточными антигенами перевиваемой линии клеток эпителия человека (HEp-2). Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержит все антигены, характерные для человеческой клетки, что позволяет выявлять в одном тесте все основные антинуклеарные антитела. Метод непрямой иммунофлюоресценции на клеточной линии НЕр2 рекомендован в качестве золотого стандарта выявления антинуклеарных антител ведущими экспертами, включая европейские (EASI group 2010) и американские группы экспертов (ACR ANA Task force 2008). В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в автоматизированных иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител (таком как №125 Антинуклеарные антитела, скрининг ИФА). В свою очередь, легко растворимые компоненты ядра клетки могут утрачиваться из ядер клеток при фиксации препарата для проведения исследований АНФ методом непрямой иммунофлюоресценции (№1267). Поэтому использование ИФА-методов (антитела к экстрагируемым антигенам — ЭНА, антинуклеарные антитела, ИФА — АНА № 125) в комплексе с выявлением антинуклеарного фактора на клетках линии НЕр2 методом непрямой иммунофлюоресценции (АНФ №1267) позволяет избежать ложно-отрицательных результатов тестирования при системных ревматических заболеваниях.

Интерпретация

Отрицательный результат антинуклеарного фактора (АНФ) с вероятностью до 90% исключает диагноз системной красной волчанки, диффузной склеродермии, синдрома Шегрена, CREST-синдрома, смешанного заболевания соединительной ткани, ювенильного ревматоидного артрита, а также с вероятностью до 80% — наиболее частые формы аутоиммунного поражения печени, в том числе аутоиммунный гепатит 1 типа и первичный билиарный цирроз. Тип свечения при отрицательном результате не определяется. Результат данного теста может быть ложноотрицательным в отношении ряда цитоплазматических антигенов (антитела к рибосомальному Р-протеину, Jo-1), а также при детекции АНФ у некоторых групп пациентов. Например, в случае скринингового тестирования АНФ у детей (<16 лет) референтное значение может быть ниже (<40). Положительный результат исследования антинуклеарного фактора (АНФ) указывает на наличие антинуклеарных антител и обычно отмечается у пациентов с системными аутоиммунными заболеваниями. С наибольшей частотой АНФ отмечается при диффузных заболеваниях соединительной ткани (85-90%), аутоиммунных заболевания печени (70-80%), олигоартикулярном ювенильном ревматоидном артрите (90%), ревматоидном артрите (30%), воспалительных миопатиях (40%), синдроме Рейно (15-20%) и аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы (20%). Выявление АНФ играет важную роль в диагностике аутоиммунного гепатита 1 типа. Низкие титры АНФ часто отмечаются на фоне инфекционных и онкологических заболеваний. У клинически здоровых лиц частота низких титров АНФ составляет до 10 %, в пожилом возрасте вероятность выявления АНФ значительно возрастает.

Краткое описание определяемого вещества Антинуклеарный фактор

При системной красной волчанке (СКВ) и других системных ревматических заболеваниях иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т.е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Такие эндогенные нуклеопротеиновые аутоантигены могут образовываться в ходе процесса апоптоза эпителиальных клеток (каскад генетически запрограммированных реакций, приводящих к удалению поврежденной или дефектной клетки) и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций или лекарственных препаратов, одновременно с нарушенным или замедленным удалением продуктов апоптоза, запускает аутоиммунные ответы при СКВ. Нуклеопротеиновые антигены конденсируются в апоптотических тельцах, которые становятся мишенью для аутоантител.

В настоящее время описаны около 200 разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление, особенно в местах, где сосуды особенно тонки, в том числе в почках, коже, центральной нервной системе, синовиальной оболочке суставов, плевре.