Иммуногистохимия, или иммуногистохимический анализ — исследование, во время которого в образцах ткани с помощью антител выявляют определенные молекулы. Этот метод диагностики нашел широкое применение в онкологии.
Немного теории и истории. Для того чтобы обнаруживать и уничтожать чужеродные вещества, иммунная система использует особые молекулы — антитела. Они отличаются специфичностью: каждое антитело может связываться строго с определенным антигеном.
В 1941 году американский иммунолог Альберт Кунс впервые решил использовать антитела в лаборатории, чтобы «распознавать» с помощью них белки бактерий. В 1984 году биохимик из Аргентины Сезар Мильштейн получил Нобелевскую премию за то, что создал гибрид опухолевой клетки с лимфоцитом, которая могла синтезировать моноклональные антитела. После этого началось производство моноклональных антител для диагностических и лечебных целей.
В 1994 г. С. Тэйлор применил иммуногистохимический анализ, чтобы проверить 20 000 опухолей, и обнаружил, что диагнозы в половине случаев были ошибочными. Иммуногистохимия зарекомендовала себя как эффективный метод диагностики.
Метод исследования
Исключительно высокие характеристики результатов, полученных с использованием IMMULITE 2000XPi, обеспечены хемилюминесцентной технологией. Появление тестов третьей генерации стало возможным благодаря сочетанию уникальной ферментатавно-усиленной хемилюминесценции с эксклюзивной технологией промывки.
Какие молекулы-мишени выявляют во время иммуногистохимии?
Количество возможных мишеней измеряется сотнями. Перед исследованием врач должен понимать, что он ищет, и использовать соответствующие антитела. В онкологии мишенями являются опухолевые маркеры — вещества, которые в здоровых клетках отсутствуют вообще или присутствуют в значительно меньшем количестве. Вот некоторые примеры:
- Рецепторы к эстрогенам и прогестерону помогают идентифицировать гормонально-позитивный рак молочной железы и разобраться, помогут ли женщине гормональные препараты.
- Простатспецифический антиген (ПСА) имеет значение в диагностике рака простаты.
- Альфа-фетопротеин — присутствует в гепатоцеллюлярной карциноме (рак печени).
- Цитокератины помогают в диагностике рака и некоторых сарком (злокачественных опухолей соединительной ткани).
- Фермент CD10 (CALLA) связан с карциномой почек, лимфобластным лейкозом.
Иммунохимический анализатор ACCESS® 2
ACCESS® 2 — первый представитель семейства полностью автоматических иммунохимических анализаторов компании Beckman Coulter.
Иммунохемилюминисцентый анализатор ACCESS® 2 — разработан на базе современной технологии иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием парамагнитных микрочастиц в качестве твердой фазы и ферментативно усиленной хемилюминесценции как метода детекции.
Сочетание высокой производительности, достаточно большого количества реагентов на борту и небольших размеров прибора, наилучшим образом соответствует потребностям лабораторий со средним и небольшим потоком иммунохимических исследований В ряду аналогичных систем для ИФА Access выделяется надежностью и простой конструкции, удобством в эксплуатации и точностью получаемых результатов.
Как это работает?
Иммуногистохимия бывает прямой и непрямой. В первом случае используют один вид антител, которые должны вступить в связь с определенной молекулой-мишенью. Если молекула-мишень присутствует в ткани, и реакция произошла, опухолевая ткань окрашивается:
- Чаще всего к антителу присоединяют фермент, например, пероксидазу. Этот фермент катализирует химическую реакцию, которая приводит к изменению цвета.
- Иногда к антителу присоединяют флюоресцин или родамин, при этом окрашивание выявляют с помощью флюоресцентной микроскопии.
- всего применяют непрямую иммуногистохимию. При этом используют два антитела. Одно соединяется с антигеном, второе — с полученным комплексом антиген-антитело. Маркер, который вызовет изменение цвета, связывают со вторым антителом.
Непрямой метод имеет некоторые преимущества:
- Он обладает более высокой чувствительностью, потому что с одним первичным антителом (тем, которое связывается с белком-мишенью) может связаться несколько вторичных антител.
- Исследование занимает немного времени: для того, чтобы произошла реакция, нужно примерно 3 часа.
- Непрямая иммуногистохимия требует небольшого количества антител. Например, вторичное антитело, направленное на иммуноглобулины кролика, будет реагировать на любое первичное антитело «кроличьего» происхождения. Не нужно создавать много разных видов вторичных антител с окрашивающей или флуоресцентной меткой.
Краткая характеристика некоторых опухолевых маркеров
| Онкомаркер | Краткая характеристика | Рекомендованная область применения |
| Бета-2-микроглобулин (в моче и сыворотке) | Белок бета-2-микроглобулин идентичен легкой цепи антигенов HLA (свободный и связанный), в норме выявляется в биологических жидкостях лишь в незначительных количествах. | Рекомендуется использовать для подтверждения диагноза и мониторинга пациентов с множественной миеломой, неходжкинскими лимфомами. Увеличение концентрации маркера зависит от стадии заболевания, степени злокачественности, и типа клеток. Мониторинг после трансплантации органов. |
| Хорионический гонадотронин (ХГЧ) | ХГЧ-в норме синтезируется в синцитиотрофобласте плаценты. | У мужчин и небеременных женщин повышение концентрации ХГ является достоверным признаком злокачественного роста. Определение ХГ рекомендуется применять для диагностики, мониторинга эффективности терапии и раннего выявления рецидивов трофобластических опухолей, хорионкарциномы яичника или плаценты, хорионкарценома, семином. Наибольшую чувствительность проявляет по отношению к карциноме яичника или плаценты. |
| Альфа-фетопротеин (АФП) | Эмбриоспецифичный гликопротеин (до 4% углеводов), по составу аминокислот сходен с альбумином. При беременности вырабатывается клетками желточного мешка, позднее печенью эмбриона, а также клетками ЖКТ плода. | Рекомендуется для выявления и мониторинга течения и эффективности терапии первичной гепатоцеллюлярной карциномы, гермином, выявления пороков развития плода и мониторинга состояния плода в течение беременности. Повышенный уровень АФП наблюдается при тератокарциномах желточного мешка яичника или яичек. |
| Раковоэмбриональный антиген (РЭА) | Гликопротеин с высоким содержанием углеводов, вырабатывается в тканях пищеварительного тракта эмбриона и плода. После рождения плода его синтез подавляется и практически не выявляется ни в крови, ни в других биологических жидкостях взрослого здорового человека. | Повышение концентрации РЭА наблюдается при различных карциномах пищеварительного тракта, а также при раке легких, молочной железы, головы и шеи, злокачественных новообразованиях соединительнотканного происхождения. При развитии опухолей различной локализации, уровень РЭА повышается и достаточно точно отражает состояние злокачественного процесса. |
| CA 125 | Гликопротеин, вырабатываемый клетками серозных злокачественных опухолей яичников. | Маркер мониторинга течения и эффективности терапии при различных типах рака яичников (серозный, эндометриальный, светлоклеточный). Тест позволяет выявить рецидив заболевания за 3-4 месяца до его клинического появления. |
| CA 15-3 | Муциноподобный гликопротеин | В основном используется для мониторинга при раке молочной железы (РМЖ). Повышенный уровень маркера наблюдается примерно у 80 % женщин с метастазирующим РМЖ, а рецидив сопровождается значительным повышением уровня задолго до клинических проявлений. |
| CA 19-9 | Гликопротеин, вырабатываемый эпителием ЖКТ плода, незначительные концентрации обнаруживают в слизистых клетках взрослых людей, а также в поджелудочной железе, печени и лёгких. | Применяют для диагностики и мониторинга лечения, а также раннего обнаружения рака поджелудочной железы, желудка, толстого кишечника и прямой кишки. |
| CA 242 | Эпитон CA 242 экспрессируется на том же муциновом апопротеине, что и CA 19-9, при этом в доброкачественных опухолях экспрессия СА 242 низкая, а в злокачественных его экспрессия значительно выше. | На сегодняшний день является одним из основных маркеров, используемых для диагностик и мониторинга рака поджелудочной железы, рака толстой и прямой кишки. Специфичность намного выше, чем у СА 19-9, позволяет проводить диагностике уже на ранних стадиях заболевания. По различным данным с помощью этого теста удается прогнозировать развитие рецидивов колоректального рака за 5-6 месяцев. |
| Простата специфичный антиген (ПСА) | ПСА-гликопротеин, секретируемый клетками эпителия канальцев предстательной железы. | Является наиболее чувствительным и специфичным маркером. Применяется для диагностики и мониторинга лечения рака предстательной железы. |
| TPA cyk (цитокератин) | Является циркулирующим комплексом фрагментов цитокератинов -8 и -18 попадает в кровь в процессе некроза опухолевых клеток, а также в S,G2 и митотической фазах нормального клеточного цикла, поэтому концентрация его в сыворотке отражает скорость возобновления клеток. | Используется для дифференции стабильной и прогрессирующей стадий заболевания, а также для прогнозирования наблюдения за ходом болезни в процессе лечения пациентов с эпителиально-клеточной карциномой. |
| UBC 11 (цитокератин) | Маркер рака мочевого пузыря | Чувствительный фактор индикатор пролиферации опухолевых клеток в мочевом пузыре, может быть использован для оценки прогноза, мониторинга и контроля лечения. |
| TPS | Тканевой полипептид, цитокератин | Уровень TPS определяется у пациентов с эпителиально-клеточными карциномами, например, раком груди, простаты, яичников и гастроинтестинальной карциномой. Особенно в высоких концентрациях детектируется у пациентов с быстрым метастазированием. Прогностическое значение имеет уровень до операции, высокий уровень после химиотерапии коррелирует с однолетней выживаемостью. |
| Tumor M2-PK | Метаболический онкомаркер. Для большинства опухолей человека характерна продукция изомерной формы пируваткиназы — Tumor M2-PK. Его концентрация указывает на переключение клеток с нормального типа метаболизма на опухолевой, отмечена высокая корреляция со степенью злокачественности (стадии опухоли). | Маркер степени агрессивности злокачественной опухоли. Выявляет специфический тип метаболизма опухолевых клеток независимо от их происхождения и локализации. В отличие других онкомаркеров, используемых в клинической практике, является не накопительным, а метаболическим маркером, и наиболее рано и в достаточном для определения количестве поступает в кровоток. Определение содержания TU M2-PL дает возможность ранней диагностики опухолей, возникновения метастазов или рецидивов опухоли (рак почки легкого, молочной железы, злокачественные опухоли пищевода, желудка, поджелудочной железы, колоректальный рак). |
специалисту Вы можете по следующим электронным адресам
Какие задачи в онкологии помогает решать иммуногистохимия?
Иммуногистохимический анализ помогает врачам-онкологам:
- Отнести злокачественную опухоль к тому или иному типу.
- Выяснить, в каких генах опухолевых клеток произошли мутации, какие белки способствуют прогрессированию рака.
- Выявить первичную опухоль и ее метастазы.
- Определить, произошла ли злокачественная трансформация клеток.
- Определить прогноз для пациента.
- Разобраться, поможет ли в данном случае таргетная терапия.
- Определить, чувствительны ли опухолевые клетки к химиотерапии, лучевой терапии.
Какова роль иммуногистохимии в современной онкологии?
Иммуногистохимический анализ помогает изучить характеристики злокачественной опухоли, которые не могут выявить другие методы диагностики. Зачастую это играет важную роль в уточнении диагноза и назначении правильного лечения. Врач может определить, какие комбинации препаратов будут наиболее эффективны для конкретного больного, иными словами, реализуется принцип персонализированного лечения. Зачастую это помогает улучшить результаты, подобрать эффективное лечение для пациентов, которым не помогает стандартная терапия.
Запись на консультацию круглосуточно
+7+7+78
Иммунохимические исследования сыворотки крови
Иммунологический анализ крови – это метод лабораторного исследования, позволяющий оценить состояние общего иммунитета, его напряженность – то есть насколько защитная система организма задействована в момент анализа, определить количество и функцию иммунных клеток крови, присутствие в ней антител.
Антитела (англ. antibody) – это специальные белки иммуноглобулины (Ig), которые вырабатывает иммунная система в ответ на попадание любого чужеродного агента в организм для борьбы с ним. Антитела обладают способностью образовывать прочные комплексы с антигенами для последующего удаления их из организма.
К антигенам относятся белки, полисахариды, нуклеиновые кислоты, в том числе и в составе компонентов различных биологических структур (клеток, тканей, вирусов и т.д.).
Способность антигенов вызывать иммунный ответ называется иммуногенностью, а способность образовывать комплексы с антителами – антигенностью.
Иммунологический анализ способен выявить:
- первичный и вторичный иммунодефициты
- помочь при диагностике аутоиммунных, гематологических, инфекционных и лимфопролиферативных заболеваний
Иммунохимическое исследование позволяет определить уровень гормонов, антител, биологически активных молекул, в том числе для диагностики и контролирования анемии, заболеваний щитовидной железы, эндокринологических нарушений.
Иммуноглобулины – белки, обладающие активностью антител (способностью специфично связывать определенные антигены).
В отличие от большинства белков сыворотки крови, которые вырабатываются в печени, иммуноглобулины продуцируются плазматическими клетками – потомками стволовых клеток предшественников В-лимфоцитов в костном мозге. По структурным и функциональным различиям выделяют 5 классов иммуноглобулинов – IgG, IgA, IgM, IgD, IgE и ряд субклассов. Поликлональное увеличение количества иммуноглобулинов – нормальный ответ на инфекции.
Когда назначается иммунологический анализ крови?
Иммунологическое исследование проводится:
- в случае повторяющихся инфекционных заболеваний
- в случае если инфекционное заболевание носит тяжёлый и затяжной характер
- при подозрениях на врожденный или приобретенный иммунодефицит
- при подозрении на аутоиммунное заболевание
- при аллергических реакциях
- перед серьёзными хирургическими вмешательствами
- в случае, если послеоперационный период протекает с осложнениями
- в целях контроля за ходом лечения некоторыми группами медикаментов (иммунодепрессантами, иммуномодуляторами и т.п.)
Показатели иммунологического анализа крови
Иммунологический анализ включает в себя комплекс показателей, отражающих состав и функциональную активность основных клеток иммунной защиты в разбивке по видам клеток и продукты их деятельности (иммуноглобулины). Развернутый анализ иммунной системы является достаточно сложным, требующим много времени, поэтому в зависимости от цели исследования иммунологический анализ может быть ограничен показателями, представляющими конкретную функцию иммунитета или затрагиваемые конкретной патологией.
Чаще всего исследуются:
- Субпопуляции лимфоцитов – белых кровяных телец, различные виды которых распознают чужеродные структуры (антигены), вырабатывают антитела, направленные против чужеродных агентов, регулируют интенсивность иммунных процессов, распознают и уничтожают изменённые клетки организма (например, раковые клетки). Иммуноглобулины – антитела, функцией которых является нейтрализация инфекционных возбудителей и токсинов. Прежде всего, исследуются иммуноглобулины классов A, M, G
- Иммуноглобулины A (IgA) обеспечивают местный иммунитет слизистых оболочек. Повышенный уровень IgA отмечается при заболеваниях кожи, органов пищеварения и дыхания. Также это характерно при интоксикациях, алкоголизме, патологии печени и почек
- Иммуноглобулины M (IgM) активно вырабатываются при первичной защитной реакции организма, поэтому их повышенное количество наблюдаются в начале любого заболевания. Повышенное значение IgM также наблюдается при заболеваниях печени (прежде всего гепатите или циррозе печени)
- Иммуноглобулины G (IgG) — самый массовый класс иммуноглобулинов. Они являются основной защитой, вырабатываемой в ответ на проникновение в организм инфекции. Их задача – убивать грибок, вирус, патогенные бактерии, обезвреживать вырабатываемые возбудителем инфекции токсины. Именно они отвечают за длительный иммунитет, защищающий нас от повторного поражения инфекцией
- Иммуноглобулины Е (IgE) и D (IgD), вырабатываются, в основном, в ответ на паразитарную инфекцию (поражение глистами) или в случае атопической аллергии. Для определения чувствительности организма к тем или иным аллергенам проводится специальное исследование – аллергопанель, выявляющее специфические антитела к конкретной группе аллергенов (как правило это иммуноглобулины классов Е или G)
Подготовка к иммунологическому анализу крови
Для того чтобы результаты анализа были точными, сдавать кровь следует натощак. Лучше всего это сделать утром. Оптимально пациент должен не есть и не пить ничего, кроме воды в течение 12 часов перед сдачей анализа. Накануне анализа не следует принимать алкоголь. В течение часа перед сдачей анализа желательно не курить.
Непосредственно перед сдачей анализа желательно присесть и находиться в покое 10-15 минут, чтобы исключить влияние физических и эмоциональных нагрузок на результаты исследований.
Иммунохимические исследования белков мочи
Иммунохимические методы исследования мочи применяются для того, чтобы врач мог оценить общее состояние организма, а также выявить даже малейшие отклонения в анализах, что указывает на определённые заболевания в начальной стадии. Данный анализ даёт детально точную картину заболевания и позволяет специалисту подобрать наиболее эффективный метод лечения. Преимущества иммунохимических методов исследования мочи перед другими существующими стандартными методиками заключаются не только в достоверно более высокой чувствительности в диагностике общей протеинурии (наличие белка в анализе мочи, что указывает на развитие воспалительных процессов разного характера в организме человека) , но также и в возможности выявления в этой биологической жидкости отдельных белковых компонентов, определении их особых характеристик, как бы, «протеомики» мочи или селективной протеинурии.
Мочу необходимо собирать в течение 24 часов, сохраняя обычный питьевой режим. Банку с мочой нужно хранить в прохладном месте. Утром, примерно в 6—8 часов освободить мочевой пузырь (эту порцию мочи вылить). Затем в течение суток собирать всю мочу в чистый сосуд емкостью 2 литра. Последняя порция берется точно в то же время, когда накануне был начат сбор (в 6—8 часов). Количество суточной мочи следует измерить мерным стаканом, отлить 10—50 мл в чистый пластиковый контейнер и доставить в лабораторию НМИЦ гематологии. При сдаче анализа в лабораторию нужно обязательно указать объем суточной мочи.
